رقعة پروتين
رقعة الپروتين، الرقعة الانجذابية، رقعة التنقية Protein tag، هي قطاع من تسلل الحمض الأميني لبروتين معين. تمت هندسته وراثيا داخل الپروتين لجعل عملية تنقيته سهلة. [1]
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
طرق التنقية
ويمكن القيام بهذا العمل بعدة طرق:
1- اذا كان البروتين الذي يجرى انتاجه كبروتين اندماجي (أي عدة بروتينات تصنع كببتيد متعدد واحد بواسطة الخلية، وتحتاج الى أن تقتلع فيما بعد بواسطة عالم التقنية الحيوية). حينئذ تكون رقعة التنقية ، تسلسلا حمضيا أمينيا قصيرا بين وحدات البروتين الاندماجي والتي تسمح للبروتين بأن يقتلع بسهولة. قد يكون هذا التسلسل النوعي الذي تتعرف عليها البيبتيداز أو البروتياز، وعلى سبيل المثال فان تسلسل (ليوسين - فالين – برولين – أرجنين – جليسرين – سيرين) يتم التعرف عليها بواسطة انزيم الثرومين الذي يلتصق بين Arg والGly.
2 – قد تكون الرقعة بروتينا آخر، وعلى سبيل المثال فان الانزيم الذي يجعل بروتينا جديدا أسهل في الاكتشاف أو البروتين ذلك الذي يرتبط ببعض المواد الأخرى بقوة (مثل بروتين الأفيدين، الذي يرتبط بفيتامين البيوتين بقوة)، والذي قد يسمح للبروتين بأن ينقي عن طريق التحليل الكروماتوجرافي الانجذابي، وعادة تقوم الانزيمات بالوفاء بكلا الدورين، حيث انها تحفز تفاعل الركائز وتربطها بالكوابح بطريقة قوية. وقد استخدمت القطاعات القصيرة من سليوليز (الانزيم الذي يحلل السيلليوز)، في صنع البروتينات الاندماجية، التي تلتصق بمصفوفة الانجذاب السيلليوزي.
3 – قد تكون الرقعة تسلسلا حمضيات أمينيا قصيرا، إما أن تكون عشوائية أو أن يتم اختيارها من بعض البروتينات الأخرى. والتي يتم التعرف عليها بواسطة جسم مضاد. ويرتبط الجسم المضاد بعد ذلك بالبروتين، في حين انه لا يستطيع ذلك من قبل. واحدى هذه البيبتيدات القصيرة التي تعرف بFLAG تم تصميمها بطريقة معينة بحيث يكون من السهل عليها أن تصنع أجساما مضادة ضدها.
4 – وقد تكون الرقعة، عدة أحماض أمينية قليلة، والتي تستعمل فيما بعد كرقعة كيميائية للبروتين. وعلى سبيل المثال ، سلسلة الأحماض الأمينية موجبة الشحنة، ترتبط بمرشح سالب الشحنة، وقد يمكن استعمال هذا كقواعد لأحد نظم الفصل. وترتبط بعض الأحماض الأمينية بالمعادن بطريقة قوية، وخصوصا عندما تكون في أزواج، ويمكن استغلال هذه الخاصية الكيميائية، عن طريق استخدام مرشح، ترتبط به ذرات المعدن كيميائية لسحب بروتين للخارج من خليط من البروتينات.
قوائم رقع البروتين
- Isopeptag - a covalently binding and genetically encoded tag
- BCCP
- Myc-tag
- Calmodulin-tag
- FLAG-tag
- HA-tag
- His-tag
- Maltose binding protein-tag
- Nus-tag
- Glutathione-S-transferase-tag
- Green fluorescent protein-tag
- Thioredoxin-tag
- S-tag
- Softag 1
- Softag 3
- Strep-tag
- SBP-tag
- Ty tag