رحلان كهربائي للهلام

(تم التحويل من Gel electrophoresis)
الرحلان الكهربائي للهلام
Gel electrophoresis
Gel electrophoresis apparatus.JPG
Gel electrophoresis apparatus - An agarose gel is placed in this buffer-filled box and electrical field is applied via the power supply to the rear. The negative terminal is at the far end (black wire), so DNA migrates toward the camera.
التصنيفرحلان كهربائي Electrophoresis
تقنيات أخرى
متعلقاترحلان كهربائي شعري
SDS-PAGE
Two-dimensional gel electrophoresis
Temperature gradient gel electrophoresis

الفصل الكهربائي للهلام Gel electrophoresis هي عملية فصل جزيئات الدنا أو الرنا أو البروتينات باستخدام مجال كهربائي مطبق على موجدة هلام gel matrix.[1] وعادة ما يـُجرى الرحلان الكهربائي للهلام لأغراض تحليلية، وكثيرا ما يكون ذلك بعد تكبير الدنا عن طريق PCR، ولكن يمكن استخدامه أيضاً كتقنية اعداد قبل استخدام طرق أخرى مثل مطيافية الكتلة وRFLP, PCR والاستنساخ وسلسلة الحمض النووي، أو اللطخة الجنوبية للمزيد من التشخيص.

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

الفصل

يتم فصل بروتينات عينة من الأنسجة أو الخلايا باستخدام الرحلان الكهربي. فصل البروتينات قد يكون باستخدام نُقْطَةُ تَساوِي الكَهْرَبِية Isoelectric point (pI)، الوزن الجزيئي، الشحنة الكهربائية، أو مجموعة من هذه العوامل. طبيعة الفصل تعتمد على طريقة معالجة العينة وطبيعة الهلام.

إلى حد الآن، الطريقة الأكثر شيوعاً للفصل الكهربائي للهلام توظف هلامات متعدد الأكريلامايد polyacrylamide ومحاليل تحتوي على دودسيل كبريتات الصوديوم Sodium Dodecyl Sulfate (SDS).

SDS-PAGE أي (الفصل الكهربائي لهلام دودسيل كبريتات الصوديوم متعدد الأكريلاميد SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) تحافظ على سلسلة البروتينات في حالة متمسخة denatured state حالماً تتم معالجتها مع عوامل اختزال قوية للقضاء على الأشكال الثانوية والثالثية. (مثل تحويل الروابط ثنائية الكبريت S-S إلى SH و SH) وبذلك يسمح لفصل البروتينات حسب وزنها الجزيئي. يتم تغطية البروتينات في العينة بدودسيل كبريتات الصوديوم السالبة الشحنة ونقلها إلى القطب الكهربائي الموجب الشحنة خلال شبكة الأكريلاميد في الهلام.


البروتينات

SDS-PAGE autoradiography - The indicated proteins are present in different concentrations in the two samples.

البروتينات الصغيرة تهاجر أسرع خلال هذه الشبكة وبذلك يتم فصل البروتينات حسب الحجم (عادة ما يتم قياسها بالكيلودالتون، kD، kiloDaltons). تركيز الأكريلاميد يحدد دقة الهلام - كلما زاد تركيز الأكريلامايد كلما زادت دقة البروتينات ذات الأوزان الجزيئية العالية. البروتينات تهاجر ببعد واحد خلال الهلام لأغلب البقع.

الهلام ويلاحظ فيه الدرج بصورة حزم زرقاء اللون بسبب الصبغة الزرقاء كوماسي بلو Coomassie Blue

يتم تحميل العينات في آبار في الهلام. يتم حفظ إحدي الأسطر للـ مدروج أو العلامات، وهما خليط متوفر تجارياً من عدة بروتينات معروفة الوزن الجزيئي، عادة ما تكون مصبوغة لكي تُظهر حزم ملونة مرئية. أحد الأمثلة على الدرج، هو درج الأوزان الجزيئية الكامل المدى لشركة GE (كما في الشكل). عندما يتم تطبيق فرق الجهد على الهلام، تهاجر البروتينات ضمنه بسرع مختلفة. هذه المعدلات الزمنية المختلفة للتقدم (حركات الفصل الكهربائي المختلفة) تُفصل إلى حُزم ضم كل سطر.

من الممكن أيضاً استخدام الفصل الكهربائي ثنائي الأبعاد الذي يفصل البروتينات من عينة واحدة في بُعدين. البروتينات تفصل بحسب النقطة متوازنة الكهربة (تركيز أيونات الهيدروجين pH الذي تكون فيه الشحنة متعادلة) في البعد الأول، وبحسب الوزن الجزيئي في البعد الثاني.

انظر أيضاً

الهامش

  1. ^ Berg JM, Tymoczko JL Stryer L (2002). Biochemistry (5th ed.). WH Freeman. ISBN 0-7167-4955-6.

وصلات خارجية